Խոզի ցիրկովիրուսի տիպի-Ⅱ հակամարմինների ELISA հայտնաբերման հավաքածուն նախատեսված է in vitro խոզերի շիճուկում հատուկ PCV հակամարմինների որոշման համար: Թեստն օգտագործվում է խոզի ցիրկովիրուսի տիպի-Ⅱ պատվաստանյութով պատվաստվածներին գնահատելու համար խոզաբուծական ֆերմաներում:
Նմուշ:շիճուկ
Տրամադրված նյութեր.
Փորձարկման ընթացակարգեր և մեկնաբանություն
ՔԱՅԼ 1 Փորձարկման ընթացակարգ
1.1 Լվացքի լուծույթի պատրաստում
Աշխատանքային կոնցենտրացիայի լվացման հեղուկՕգտագործելուց առաջ լվացքի լուծույթը պետք է վերականգնվի սենյակային ջերմաստիճանի (20-25 աստիճան) և հավասարաչափ թափահարվի, որպեսզի այն միատարր լինի: Այնուհետև լվացքի խտացված լուծույթը 20 անգամ նոսրացրեք մաքրված ջրով (օրինակ՝ 95 մլ մաքրված ջրին ավելացնում են 5մլ խտացված լվացքի լուծույթ), լավ խառնեք և նոսրացված լվացքի հեղուկը կարելի է պահել 2-8 աստիճան ջերմաստիճանում 7 օր։
1.2 Նմուշի պատրաստում
① Վերցվել է կենդանու ամբողջական արյուն, ցենտրիֆուգվել է 4000 պտույտ րոպեում 10 րոպե, և վերցված հեղուկը հավաքվել է: Շիճուկը կարող է նաև մակարդվել բնական ճանապարհով՝ առանց հեմոլիզի:
② Շիճուկի նմուշը նոսրացրեք 1:25 հարաբերակցությամբ (5 ուլտր շիճուկի նմուշ ավելացրեք 120 մլ նմուշի լուծիչին) և մանրակրկիտ խառնեք:
Նշում. Բացասական և դրական հսկիչները չպետք է նոսրացվեն:
① Վերցրեք ֆերմենտի պիտակը Microplate (ըստ նմուշների քանակի, այն կարող է ապամոնտաժվել և մի քանի անգամ օգտագործվել), ավելացրեք 100 մլ նոսրացված շիճուկ ֆերմենտային պիտակի վրա Microplate, յուրաքանչյուրը դրեք երկու հորատանցք բացասական և դրական նմուշների համար, և յուրաքանչյուրը 100 մլ ավելացրեք բացասական և դրական վերահսկման համար ռեակցիայի հորին համապատասխանաբար: Նմուշով թափահարեք նմուշը ջրհորի մեջ՝ օգտագործելով կնքող ափսեի թաղանթը, որպեսզի ծածկեք ափսեը և ինկուբացե՛ք 37 աստիճան ջերմաստիճանում 30 րոպե:
②Բացեք հերմետիկ ափսեի թաղանթը, լավ թափահարեք ափսեի մեջ գտնվող լուծույթը, յուրաքանչյուր հորի մեջ ավելացրեք 300 մկլ աշխատանքային կոնցենտրացիայի լվացման հեղուկ, այնուհետև թափեք հեղուկը ջրհորի մեջ: Կրկնեք վերը նշված քայլերը 5 անգամ և վերջապես չորացրեք մաքուր ներծծող թղթի վրա:
③Ավելացրեք 100 մկլ Enzyme Conjugate յուրաքանչյուր ջրհորի մեջ, ծածկեք ափսեը և ինկուբացրեք 37 աստիճանում 45 րոպե:
④Բացեք հերմետիկ ափսեի թաղանթը, ափսեի մեջ լուծույթը լավ թափահարեք, յուրաքանչյուր հորի մեջ ավելացրեք 300 մկլ աշխատանքային կոնցենտրացիայի լվացող հեղուկ, այնուհետև թափեք հեղուկը ջրհորի մեջ: Կրկնեք վերը նշված քայլերը 5 անգամ և վերջապես չորացրեք մաքուր ներծծող թղթի վրա:
⑤Ավելացրեք 100 մկլ ենթաշերտի լուծույթ յուրաքանչյուր հորի մեջ, ծածկեք ափսեը և 10 րոպե ինկուբացրեք լույսից 37 աստիճան հեռավորության վրա:
Յուրաքանչյուր հորի OD450 արժեքը կարդացվել է 96 հորատանցք ունեցող միկրոափսե ընթերցողի վրա:
2.1 Վավերացում
Բացասական հսկողության միջին OD450nm արժեքը եղել է<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥5, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.
2.2 Հաշվարկի մեթոդ
Յուրաքանչյուր նմուշի համար հաշվարկեք S/P-ը հետևյալ կերպ՝ օգտագործելով ուղղված նմուշը և հսկիչ արժեքները.
S/P=(ODՆՄԻՆԱԿ-ODNC) / (ՕԴԱՀ-ODNC)
2.3 Արդյունքների մեկնաբանություն
Երբ Ս/Պ<0.15, it is judged as negative.
Երբ S/P-ը մեծ է կամ հավասար է 0,25-ի, այն գնահատվում է որպես դրական:
Երբ 0.15-ից փոքր կամ հավասար է S/P-ին<0.25, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.
