Խոզի պարվովիրուսի հակամարմինների Էլիզա հավաքածու

Հստակեցում

 

 

Փորձարկման ընթացակարգեր և մեկնաբանություն

 

ՔԱՅԼ 1 Փորձարկման ընթացակարգ

1.1 Լվացքի լուծույթի պատրաստում

Working կոնցենտրացիան wմոխրի հեղուկ.Օգտագործելուց առաջ լվացքի լուծույթը պետք է վերականգնվի սենյակային ջերմաստիճանի (20-25 աստիճան) և հավասարաչափ թափահարվի, որպեսզի այն միատարր լինի: Այնուհետև լվացքի խտացված լուծույթը 20 անգամ նոսրացրեք մաքրված ջրով (օրինակ՝ 95 մլ մաքրված ջրին ավելացնում են 5մլ խտացված լվացքի լուծույթ), լավ խառնեք և նոսրացված լվացքի հեղուկը կարելի է պահել 2-8 աստիճան ջերմաստիճանում 7 օր։

1.2 Նմուշի պատրաստում

① Վերցվել է կենդանու ամբողջ արյունը, ցենտրիֆուգվել է 4000 պտույտ րոպեում 10 րոպե, և վերցված հեղուկը հավաքվել է: Շիճուկը կարող է նաև մակարդվել բնական ճանապարհով՝ առանց հեմոլիզի:

② Փորձարկվող շիճուկը 10 անգամ նոսրացրեք շիճուկի նոսրացման ափսեի մեջ (օրինակ՝ 135 մլ նմուշի լուծիչին ավելացրեք 15 մլ շիճուկ, որը պետք է փորձարկվի):

Նշում. Բացասական և դրական հսկիչները չպետք է նոսրացվեն:

1.3 Փորձարկման կարգը

① Վերցրեք ֆերմենտի պիտակը Microplate (ըստ նմուշների քանակի՝ կարելի է ապամոնտաժել և օգտագործել մի քանի անգամ), ավելացրեք 100 մլ նոսրացված շիճուկ ֆերմենտային պիտակի վրա Microplate, յուրաքանչյուրը դրեք երկու հոր՝ բացասական և դրական վերահսկողության համար և համապատասխանաբար ավելացրեք 100 մլ ռեակցիոն հորին: Նմուշով թափահարեք նմուշը ջրհորի մեջ՝ օգտագործելով կնքող ափսեի թաղանթը, որպեսզի ծածկեք ափսեը, և ինկուբացրեք 37 աստիճանում 30 րոպե:

②Բացեք կնքող ափսեի թաղանթը, լավ թափահարեք լուծույթը ափսեի մեջ, յուրաքանչյուր հորի մեջ ավելացրեք 300 մկլ աշխատանքային կոնցենտրացիայի լվացման հեղուկ, այնուհետև թափեք հեղուկը ջրհորի մեջ: Կրկնեք վերը նշված քայլերը 5 անգամ և վերջապես չորացրեք մաքուր ներծծող թղթի վրա:

③Ավելացրեք 100 մկլ Enzyme Conjugate յուրաքանչյուր ջրհորի մեջ, ծածկեք ափսեը և ինկուբացրեք 37 աստիճան ջերմաստիճանում 30 րոպե:

④Բացեք հերմետիկ ափսեի թաղանթը, ափսեի մեջ լուծույթը լավ թափահարեք, յուրաքանչյուր հորի մեջ ավելացրեք 300 մկլ աշխատանքային կոնցենտրացիայի լվացող հեղուկ, այնուհետև թափեք հեղուկը ջրհորի մեջ: Կրկնեք վերը նշված քայլերը 5 անգամ և վերջապես չորացրեք մաքուր ներծծող թղթի վրա:

⑤Ավելացրեք 100 մկլ ենթաշերտի լուծույթ յուրաքանչյուր հորի մեջ, ծածկեք ափսեը և 10 րոպե ինկուբացրեք լույսից 37 աստիճան հեռավորության վրա:

⑥Յուրաքանչյուր հորին ավելացրեք 50 մկլ կանգառային լուծույթ և որոշեք արդյունքը 5 րոպեի ընթացքում:

 

ՔԱՅԼ 2 Արդյունքների մեկնաբանում

 

Յուրաքանչյուր հորի OD450 արժեքը կարդացվել է 96 հորատանցք ունեցող միկրոափսե ընթերցողի վրա:

2.1 Վավերացում

Բացասական հսկողության միջին OD450nm արժեքը < 0.2 էր, իսկ դրական հսկողության միջին OD450nm արժեքը 0.7-ից ավելի կամ հավասար էր, փորձարարական արդյունքները վավեր էին: Հակառակ դեպքում, թեստը պետք է կրկնվի:

2.2 Հաշվարկի մեթոդ

Յուրաքանչյուր նմուշի համար հաշվարկեք S/P-ը հետևյալ կերպ՝ օգտագործելով ուղղված նմուշը և հսկիչ արժեքները.

2.3 Արդյունքների մեկնաբանություն

Երբ S/P <0.25, այն գնահատվում է որպես բացասական:

Երբ S/P > 0.3, այն գնահատվում է որպես դրական:

Երբ 0,25 S/P-ից փոքր կամ հավասար է 0,3-ից փոքր կամ հավասար է, այն համարվում է կասկածելի և առաջարկվում է կրկնել նմուշառումը և փորձարկել մեկ շաբաթ անց:

Թեժ գրառումներ: խոզի պարվովիրուսի հակամարմինների էլիզա հավաքածու, Չինաստան խոզի պարվովիրուսի հակամարմինների էլիզա հավաքածուի մատակարարներ, արտադրողներ, գործարան